고속액체 크로마토그래피(High Perfermence Liquid Chromatography,HPLC)는 액체를 이동상으로 하는 컬럼 크로마토그래피법으로서, 고성능 충전제, 고압 펌프, 고감도 검출기를 갖추고 있어서 미량의 시료를 신속하고 간편하게, 그리고 고도의 재현성 있는 분석이 가능하다. 또한 GC에서는 열적으로 안정한 휘발성 물질이 아니면 직접 분석의 대상이 안되는 데에 반하여 HPLC에서는 적당한 용매에 녹는 물질이면 어떤 시료라도 분석대상이 될 수 있다.
장비구성 및 성능
구성
- LC본체 1세트
- PDA
- RID
- ELSD
- 컴퓨터 및 모니터 1세트
- 프린터
광다이오드 배열 검출기(Photo-Diode Array Detector:DAD):
흡수셀을 통과한 빛을 다이오드 배열판으로 반사시켜서 190nm-900nm까지의 전 파장을 동시에 검출할 수 있다. DAD 검출기는 신속하게 모든 파장의 스펙트럼 확인 및 다파장 검출이 가능하고, 탁월한 파장 재현성을 갖는다. 또한 컴퓨터 소프트웨어를 이요하여 수집한 결과를 3차원적인 크로마토그램의 해석이 가능하다.
굴절률 검출기(Refractive Index Detector):
굴절률 검출기는 거의 모든 화합물에 대하여 감도를 나타내지만, 흡광도 검출기나 형광 검출기에 비하여 감도가 낮고, 이동상의 유속과 온도에 대해서 매우 민감하게 반응한다. 굴절률 검출기는 흡광도 검출기나 전기전도도 검출기에서 검출이 안되는 고분자 화합물이나 당 등의 분석에 주로 이용된다.
ELSD(Evaporative Light Scattering Detector):
증기화 광산란 검출기는 입자가 빛과 충돌할 때 발생되는 산란광을 검출하기 때문에 UV 검출기에서 요구되는 발색단 등과 같은 물질의 광학적 특성과 관계없이 이동상 보다 비휘발성인 어떠한 시료도 검출할 수 있다. 물질 내 발색단이 없거나 미약하여 UV검출기로는 응용이 까다롭거나, 굴절률 검출기의 낮은 검출능과 기울기 용리의 제한성으로 분리능과 분리도를 개선하기 어려운 시료의 응용 등, 검출을 위한 복잡하고 까다로운 시료 전 처리 과정 없이 높은 재현성과 감도로 분석할 수 있다.
장비사용예
HPLC 시스템은 천연물을 비롯하여 식품, 농약, 생명공학, 신약개발 등 다양한 분야에서 가장 많이 사용되고 있다. HPLC를 이용한 분리분석의 기본적인 원리는 액체 크로마토그래피와 동일하며, GC 시스템과 마찬가지로 고정상(stationary phase)과 시료(sample) 및 이동상(mobile phase)와의 상호작용이 시료 성분의 분리에 영향을 미치지만, 액체 크로마토그래피 시스템은 가스 크로마토그래피 시스템과는 달리 분석 가능한 분자량의 제한이 없다. 즉, HPLC 는 GC에 비해 비교적 분자량이 크거나 비-휘발성인 시료를 분석할 수 있으며, 분석한 시료의 회수가 가능하다는 장점이 있다.
